膠體金是種常用的標(biāo)記，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的種新型的免疫標(biāo)記，有其的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡幾乎都使用其標(biāo)記。同時在式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能例用到。

檢測原理

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物性。

膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的些物理性狀，如電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等域。

膠體金標(biāo)記，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種形的粒子對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附能，可以與葡萄菌A蛋白、免疫蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的具。

免疫金標(biāo)記(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有電子密度的性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。

常用檢測

免疫膠體金光鏡染色法

細(xì)胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標(biāo)記的抗體行染色，也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上，以銀顯影液增強(qiáng)標(biāo)記，使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面，可明顯增強(qiáng)膠體金標(biāo)記的敏感性。

免疫膠體金電鏡染色法

可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織薄切片結(jié)合，然后行負(fù)染?？捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。

斑點(diǎn)免疫金滲濾法

應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體，將抗原或抗體點(diǎn)于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測相應(yīng)的抗原或抗體。

膠體金免疫層析法

將異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。

快速金標(biāo)試劑

是將異的抗體固定于酸類纖維素膜的某區(qū)帶，當(dāng)該干燥的酸類纖維素端浸入樣品(尿液或血清)后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當(dāng)移動至固定有抗體的區(qū)域時，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生異性結(jié)合。同時利用金粒具有電子密度的性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處。當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色的斑點(diǎn)。既為快速的金標(biāo)檢測方法原理?？焖俣噭?，要點(diǎn)在于所采用的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及異性等是否能達(dá)到較的標(biāo)準(zhǔn)，此為金標(biāo)試劑的質(zhì)量之重要的標(biāo)準(zhǔn)。