(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求,制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝,每袋2片。每次試驗(yàn)用20袋。
(2) 將滅菌器上、中、下3層,每層內(nèi)、中、外各設(shè)點(diǎn),共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋,共需18袋試驗(yàn)菌片。另將袋(2片)菌片放置在室溫條件下作為陽性對(duì)照。
(3) 按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時(shí)間、柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度,在滿載條件下行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿載用物品,隨滅菌器用途而定。處理畢,取出菌片,分別移種于5 ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),7d后觀察結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測(cè))。
對(duì)難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管,取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板,用無菌L棒涂抹均勻,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色,顯微鏡下觀察菌落形態(tài),或步做其他試驗(yàn),判斷有無生長或生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌,則應(yīng)重新行試驗(yàn)。
(4) 測(cè)試中,應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組。
(5) 定量陽性對(duì)照組,以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中,各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
(6) 定性陽性對(duì)照組,以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,立即將該菌片2 片,分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,放入溫箱中作定性培養(yǎng),觀察有細(xì)菌生長情況。
(7) 陰性對(duì)照組,以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2 片,分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),觀察有無細(xì)菌生長。
(8) 試驗(yàn)重復(fù)5 次。
(9)在5次試驗(yàn)中,每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片,回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片~5×10cfu/片;定性陽性對(duì)照組,細(xì)菌生長良好;陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果,試驗(yàn)作廢,重新行。
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